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在近期的核酸檢測(cè)中,基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)越來越得到重視,因?yàn)樗鼘?duì)檢測(cè)結(jié)果的可靠性、準(zhǔn)確性和安全性起到了至關(guān)重要的作用。基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室即PCR實(shí)驗(yàn)室,是一種分子生物學(xué)技術(shù),其特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加。PCR實(shí)驗(yàn)室主要可分為四個(gè)區(qū)域。
PCR實(shí)驗(yàn)室平面圖:
1、試劑準(zhǔn)備室
該區(qū)域的功能是貯存實(shí)驗(yàn)試劑的制備、實(shí)驗(yàn)試劑的分裝、主反應(yīng)混合液的制備。注意事項(xiàng)是實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目所采用的材料,如實(shí)驗(yàn)試劑與實(shí)驗(yàn)試劑原料,標(biāo)本與標(biāo)本原料等,這些都務(wù)必儲(chǔ)放于本區(qū)域內(nèi)。對(duì)于是否需要調(diào)節(jié)氣流壓力,該區(qū)域沒有嚴(yán)格規(guī)范。它的主要儀器設(shè)備有:超凈臺(tái)、加樣器、混勻器、純水機(jī)、消毒車、天平和離心機(jī)等,加樣器、天平不僅要專用外,還應(yīng)該有定期進(jìn)行校正,試劑分裝應(yīng)在超凈臺(tái)中開展,擴(kuò)增反應(yīng)混合液應(yīng)采用分子生物學(xué)級(jí)別的,實(shí)際制備好后應(yīng)該有質(zhì)檢,一是看有沒有污染、二是看檢測(cè)試劑的擴(kuò)增實(shí)際效果。
2、樣品制備室
該區(qū)域的功能是臨床標(biāo)本的儲(chǔ)存、核酸(RNA與DNA)的提取與貯存、核酸加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)量RNA時(shí)DNA的合成。注意事項(xiàng)是為了避免 相鄰板塊的空氣進(jìn)到本區(qū),壓力梯度對(duì)比相鄰板塊要設(shè)置成正壓。開展實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的操作時(shí),工作人員要防止多余的走動(dòng),以避免 加樣操作中產(chǎn)生氣溶膠污染。它的主要儀器設(shè)備有:安全柜、加樣器、消毒車、冰箱、水浴鍋、生物安全柜、離心機(jī)、混勻器。
3、擴(kuò)增室
該區(qū)域的功能是DNA擴(kuò)增、把制備的實(shí)驗(yàn)試劑制成反應(yīng)混合液。注意事項(xiàng)是試驗(yàn)擴(kuò)增的污染指數(shù)相對(duì)較高,壓力梯度相比鄰近板塊要設(shè)置成負(fù)壓,這樣做的優(yōu)勢(shì)是能合理避免氣溶膠從本區(qū)泄漏。它的主要儀器設(shè)備有:消毒車、PCR儀、離心機(jī)、可移動(dòng)紫外燈、微量加樣器,PCR儀需要進(jìn)行校準(zhǔn),并制備UPS電源,以避免因?yàn)殡妷旱牟▌?dòng),斷電對(duì)擴(kuò)增效果的不良影響。
4、產(chǎn)物分析室
此區(qū)域的功能是檢測(cè)相關(guān)擴(kuò)增片段。注意事項(xiàng)是實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)時(shí)如果已經(jīng)預(yù)置了全自動(dòng)封閉分析儀器,那么就沒有必要再劃分本區(qū)了。本區(qū)的壓力梯度相比鄰近區(qū)域要設(shè)置成負(fù)壓,這樣做的優(yōu)勢(shì)是能合理避免 擴(kuò)增物質(zhì)擴(kuò)散至其它區(qū)域。該區(qū)域的主要儀器設(shè)備有:消毒車、電泳儀、超凈臺(tái)、電熱板、成像儀、雜交儀、凝膠。
PCR實(shí)驗(yàn)室專用離心機(jī)TG16MW,HR/T16MM
以上就是一個(gè)完整的PCR實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備區(qū)域構(gòu)成,在進(jìn)行PCR操作時(shí),操作人員一定要嚴(yán)格遵守一些操作規(guī)程,最大程度地降低可能出現(xiàn)的PCR污染事故的發(fā)生。
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